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            液相色譜柱的常見故障及解決方法

            點擊次數:219     發布時間:2022-06-27
              液相色譜柱在使用一段時間后,會出現一定的常見故障,如果不能很好的判斷并解決就會影響色譜柱的使用效果,從而影響樣品的分析結果。
             
              液相色譜柱常見的幾種故障判斷及排除方法:
             
              1柱壓問題柱壓問題是使用高效液相色譜過程中需要密切注意的地方,柱壓的穩定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關。所謂柱壓穩定并不是 指壓力值穩定于一個恒定值而是指壓力波動范圍在50PSI(3.3 Bar)之間(在使用梯度洗脫時,柱壓平穩緩慢的變化是允許的)。壓力過高、過低都屬于柱壓問題。
             
              1.1 壓力過高 這是高效液相在使用中較常見的問題,指的是壓力突然升高,一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時,我們應該分段進行檢查。
             
              (1).首先斷開真空泵的入口處,此時PEEK管里充滿液體,使PEEK管低于溶劑瓶,看液體是否自由滴下,如果液體不滴或緩慢滴下,則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法:用30%的硝酸浸泡半個小時,在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下,溶劑過濾頭正常,在檢查;
             
              (2).打開Purge閥,使流動相不經過柱子,如果壓力沒有明顯下降,則是過濾白頭堵塞。處理方法:將過濾白頭取出,用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI (6.7 Bar)以下,過濾白頭正常,在檢查;
             
              (3).把色譜柱出口端取下,如果壓力不下降,則是柱子堵塞。處理方法:如果是緩沖鹽堵塞,則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質導致堵塞,則要用比現在流動相更強的流動相沖至壓力正常。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降,則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上,用流動相沖洗柱子。這時,如果柱壓仍不下降,只有換柱子入口篩板,但一旦操作不甚,很容易造成柱效下降,所以盡量少用。
             
              1.2壓力過低壓力過低的現象一般是由于系統泄漏,處理方法:尋找各個接口處,特別是色譜柱兩端的接口,把泄漏的地方旋緊即可。當然還有一個原因就是泵里進了空氣,但此時表現的往往是壓力不穩,忽高忽低,更嚴重一點會導致泵無法吸上液體。處理方法:打開Purge閥,用3~5ml/min的流速沖洗,如果不行,則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。
             
              2漂移問題 主要包括基線漂移和保留時間漂移。
             
              2.1基線漂移 一般說來,機器剛起動時,基線容易漂移,大概要半個小時的平衡時間,如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽,還有就是在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長,但如果你在實驗過程中發現基線漂移,則你要考慮下面的原因:
             
              1.紫外燈能量不足。解決方法:更換新的紫外燈
             
              2.柱溫波動。解決方法:控制好柱子和流動相的溫度,檢查是否有打開的窗戶或空調對著柱溫箱。
             
              3.流通池被污染或有氣體。 解決方法:用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池(較好斷開柱子)。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
             
              4.流動相污染、變質或由低品質溶劑配成。解決方法:檢查流動相的組成,使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑。
             
              5、樣品中有強保留的物質(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現出一個逐步升高的基線。解決方法:使用保護柱,如有必要,在進樣之間。在分析過程中,定期用強溶劑沖洗柱子。
             
              6、檢測器沒有設定在較大吸收波長處。解決方法:將波長調整至較大吸收波長處
             
              7、流動相的PH值沒有調節好。解決方法:加適量的酸或堿調至較佳PH值
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